非洲豬瘟熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)化操作流程
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1.設(shè)備預(yù)熱：
開(kāi)啟
非洲豬瘟熒光定量pcr儀關註度，選擇預(yù)運(yùn)行程序進(jìn)行系統(tǒng)預(yù)熱慢體驗，建議預(yù)熱時(shí)間≥30分鐘實現。檢查各溫控模塊性能，確保溫度波動(dòng)≤±0.5℃（95℃測(cè)試點(diǎn)）脫穎而出。
2.樣本處理：
核酸提取：采用商品化核酸提取試劑盒，按說(shuō)明書(shū)操作獲取DNA模板同時。提取后的核酸需在2小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，-20℃保存不得超過(guò)7日效高性。
試劑準(zhǔn)備：配制反應(yīng)體系（20μL體系）：
∧Ｊ?。?）2×熒光PCR反應(yīng)液 10μL
（2）引物探針混合液 1μL
√嵘?。?）酶混合物 0.5μL
「咂焚|。?）模板DNA 5μL（濃度50-100ng/μL）
〔徽鄄豢?。?）滅菌ddH?O 3.5μL
配置好的反應(yīng)體系于冰上保存?zhèn)溆茫苊夥磸?fù)凍融健康發展。
二有效保障、實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程
1.上機(jī)設(shè)置
選擇ASFV專用檢測(cè)程序：
（1）預(yù)變性：95℃ 30s
￠L效機製。?）循環(huán)擴(kuò)增（40 cycles）：
≈v實踐、僮冃裕?5℃ 5s
②退火/延伸：60℃ 30s
^戰不懈、蹮晒獠杉篎AM通道（探針檢測(cè)）
2.樣本裝載
將配置好的反應(yīng)管裝入加熱模塊市場開拓，確認(rèn)：
（1）管蓋密封完好
〈蟠罂s短。?）試管無(wú)氣泡殘留
∫鋵嵑?。?）樣本編號(hào)與軟件對(duì)應(yīng)
設(shè)置陰性對(duì)照（N/C）、陽(yáng)性對(duì)照（P/C）和標(biāo)準(zhǔn)品更默契了，建議每板設(shè)置3個(gè)N/C先進技術。
3.儀器運(yùn)行：?jiǎn)?dòng)PCR程序，實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)U(kuò)增曲線不合理波動。正常狀態(tài)下宣講手段，陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)S型擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照CT值應(yīng)在18-25之間積極拓展新的領域。
三配套設備、結(jié)果分析與報(bào)告
1.數(shù)據(jù)分析
CT值判定標(biāo)準(zhǔn)：
（1）CT≤30且呈現(xiàn)典型S型曲線為陽(yáng)性
∠鄬﹂_放。?）CT＞35或無(wú)擴(kuò)增曲線為陰性
⊥七M高水平。?）30＜CT≤35需重復(fù)驗(yàn)證
FAM通道Ct值≤閾值（可參照試劑盒要求）判定為ASFV核酸陽(yáng)性。
2.報(bào)告生成
報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包含：
贤C製。?）樣本編號(hào)及來(lái)源好宣講；
（2）CT值及擴(kuò)增曲線圖領先水平；
⌒庐a品。?）陽(yáng)性/陰性判定結(jié)果；
蛄鹤饔?。?）檢測(cè)及復(fù)核人員簽名長遠所需；
（5）檢測(cè)日期及實(shí)驗(yàn)室信息讓人糾結；
3.廢棄處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后規模，生物危害廢棄物需按規(guī)程處理，反應(yīng)管置于專用廢料桶中。
四聯動、非洲豬瘟熒光定量pcr儀注意事項(xiàng)
1.操作全程必須穿戴防護(hù)服和手套增持能力；
2.每批次實(shí)驗(yàn)需同時(shí)設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照行業內卷；
3.儀器表面每日使用75%乙醇消毒追求卓越；
4.建議每月使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行儀器校準(zhǔn)；
5.當(dāng)檢測(cè)結(jié)果異常時(shí)參與能力，必須進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn)合理需求。
本操作流程嚴(yán)格遵循GB/T 40947-2021《非洲豬瘟診斷技術(shù)》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范化的操作可有效預(yù)防交叉污染充分發揮，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性高質量。實(shí)驗(yàn)室需建立完整的質(zhì)量控制體系，定期對(duì)操作人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)選擇適用，為非洲豬瘟防控工作提供科學(xué)依據(jù)管理。
